首页 >实验技术>组织学与病理学实验技术
原位杂交步骤(DNA)               

                     
1.切片脱蜡至75%酒精。
2. 37℃干燥5分钟
3.蛋白酶K 37℃(盖上盖玻片可节省试剂)15分钟
4. TBS洗5分钟
5.  酒精脱水 (75%  95%  100% )
6.  干燥 37℃ 5 分钟或室温15-30分钟
杂交:
1. 加生物素化探针(如HPV、HBV等),盖上盖玻片
2. 变性,95℃ 8~10 分钟
3. 退火,快速冷却
4. 杂交,37℃  2~16 小时
5. 除去盖玻片,TBS 37℃  洗3~5 分钟
6. 加Streptavidin-AP (DAKO)37℃  30-60分钟
7. TBS 液洗
8.  显色, 40-60 分钟(显微镜下控制)
9.  蒸馏水洗
10.核固红复染 脱水 透明 封固
    注:玻片不能在杂交过程中干燥。蛋白酶K浓缩液需在-20℃保存,稀释好的蛋白酶K(1:10)在室温下只能稳定1个小时。如是细胞片应在冷丙酮下固定10分钟。
版权所有 浙江大学基础医学实验教学中心 [技术支持 创软科技]
本站负责人:陆源 电话:88206408 Email:luyuan@zju.edu.cn